Paquete de métodos de LC/MS/MS para ácidos grasos de cadena corta
Para el software LabSolutions™ LCMS
Ácidos grasos de cadena corta y ácidos orgánicos objetivo del análisis
De los ácidos grasos de cadena corta producidos por bacterias intestinales, el ácido acético, el ácido propiónico y el ácido butírico son bien conocidos, y se ha informado que existen algunas conexiones entre ellos y las enfermedades relacionadas con el estilo de vida, como la obesidad y la diabetes. En términos generales, los ácidos grasos de cadena corta son altamente volátiles y altamente hidrofílicos. Esto dificulta la realización del análisis del LCMS utilizando un sistema de fase inversa convencional. Por esa razón, este paquete de métodos se centra en los ácidos grasos de cadena corta (C2 a C5) que se han derivatizado con 3-nitrofenilhidrazina (3-NPH). Después de configurar las transiciones de MRM, se puede utilizar para el análisis simultáneo (de 22 componentes), incluidos los ácidos orgánicos relacionados con las vías metabólicas centrales.
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Configuración de transición de MRM
Al realizar los ajustes de transición de MRM, la selectividad puede mejorarse especificando iones característicos del producto para derivados de 3-nitrofenilhidrazina. Tenga en cuenta que algunos ácidos orgánicos tienen un grupo carbonilo derivado de las cetonas, por lo que los derivados de 3-nitrofenilhidrazina que reaccionaron con el ácido carboxílico y el grupo carbonilo son objetivo para la transición de MRM.
Protocolo de pretratamiento con derivatización
El protocolo completo necesario para el pretratamiento, incluido el paso de derivatización con 3-nitrofenilhidrazina, está incluido en el Manual de instrucciones de este paquete de métodos. Al seguir estos procedimientos, un analista debe poder realizar todo el proceso, desde la derivatización hasta la adquisición de datos y el análisis de datos, inmediatamente después de que se introduce el paquete.
Para la derivatización con 3-nitrofenilhidrazina, la carbodiimida se utiliza como agente de condensación, y la reacción continúa en condiciones leves. Además, para llevar a cabo de manera eficiente reacciones con ácidos grasos de cadena corta y ácidos orgánicos, este paquete de método incluye derivatización con 3-NPH en lugar de la 2-NPH, comúnmente más utilizada. Además, las derivatizaciones de 3-NPH después de que las reacciones son estables, y el análisis cuantitativo de los ácidos grasos de cadena corta o ácidos orgánicos en la muestra se puede realizar a través de la reacción con una cantidad adecuada de reactivo de derivatización. Además, a medida que se producen reacciones en las soluciones acuosas con este reactivo de derivatización, la muestra no se secará y no se perderán los componentes volátiles.
Reacción de derivatización con 3-nitrofenilhidrazina (3-NPH)
El siguiente ejemplo muestra un análisis usando el LCMS-8060 de una solución mixta estándar de ácidos grasos/ácidos orgánicos de cadena corta. Se muestra un cromatograma MRM de ácidos grasos de cadena corta/ácidos orgánicos derivatizados usando 3-NPH. Como se puede ver, se obtuvieron separaciones suficientes de los componentes, como los isómeros estructurales ácido butírico, ácido isobutírico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido cítrico y ácido isocítrico. Este paquete de métodos incluye transiciones de MRM formuladas previamente para lograr la optimización de derivatizaciones de 3-NPH para ácidos grasos/ácidos orgánicos de cadena corta. Como resultado, los ácidos grasos de cadena corta (C2 a C5) y los ácidos orgánicos representativos de las vías metabólicas centrales, que son difíciles de analizar con LCMS mediante un sistema convencional de fase inversa, pueden analizarse simultáneamente.
Comentarios y precauciones
Se requiere LabSolutions LCMS ver. 5.99SP2 o posterior.
LabSolutions es una marca comercial de Shimadzu Corporation.
Descargas
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Aplicaciones
| Documentos | Fecha Fecha de creación |
|---|---|
2020-11-20 | |
2018-05-14 |
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